خطوات محددة لاستخراج الكلوروفيل من خلال تجزئة الخلايا باستخدام كسارة الخلايا بالموجات فوق الصوتية

تستخدم كسارة الخلايا بالموجات فوق الصوتية تأثير التشتت للموجات فوق الصوتية في السائل لإنشاء التجويف، وبالتالي كسر الجزيئات الصلبة أو أنسجة الخلايا في السائل.
أدى تطور الصناعة البيولوجية إلى زيادة متطلبات التجارب باستخدام ساحقات الخلايا بالموجات فوق الصوتية، مثل قياس درجة حرارة العينة والتحكم فيها، وتحسين مستوى الذكاء لعينات التبريد ذات درجة الحرارة المنخفضة والجهاز بأكمله، وما إلى ذلك.
الخطوات المحددة لاستخراج الكلوروفيل من خلال سحق الخلايا بالموجات فوق الصوتية باستخدام كسارة الخلايا بالموجات فوق الصوتية:
1. قم بالطرد المركزي أو تصفية عينة المياه وقم بتثبيت غشاء مرشح ألياف الأسيتات على مرشح الشفط. صب كمية من عينة الماء للترشيح، ويجب ألا يكون الضغط السلبي أثناء الترشيح مرتفعًا جدًا (حوالي 50 كيلو باسكال). بعد سحب عينة الماء، استمر في السحب لمدة 1-2 دقيقة لتقليل الرطوبة على غشاء المرشح. إذا كان التخزين قصير المدى مطلوبًا لمدة 1-2 يوم، فيمكن تخزينه في ثلاجة عادية للتجميد. إذا كان التخزين طويل الأمد مطلوبًا (30 يومًا)، فيجب تخزينه في ثلاجة ذات درجة حرارة منخفضة (-20 درجة).
2. أخرج غشاء المرشح الذي يحتوي على العوالق النباتية وجففه في درجة حرارة منخفضة في الثلاجة لمدة 6-8 ساعة. قم بتقطيعه إلى قطع صغيرة بالمقص ووضعه في أنبوب طرد مركزي سعة 5 مل أو 10 مل. أضف 3-4 مل من 90% أسيتون لغمر الأجزاء تحت مستوى السائل. ضع الأجزاء في حاوية بالموجات فوق الصوتية واستخدم الموجات فوق الصوتية لكسر خلايا العينة. (مقارنة التجارب في أوقات وترددات مختلفة لتسهيل تحديد *زمن التجزئة وتكرارها للطرق الموحدة).
3. قم بطرد العينة المعرضة لتجزئة الخلايا باستخدام الموجات فوق الصوتية باستخدام جهاز طرد مركزي (3000-4000r/min) لمدة 10 دقائق. صب المادة طافية في دورق حجمي 5 مل أو 10 مل. قم بتخفيفه إلى 5 مل أو 10 مل مع 90٪ أسيتون ورجه جيدًا.
ضع المادة طافية على مقياس الطيف الضوئي واستخدم طبقًا لونيًا للمسار البصري مقاس 1 سم لقراءة قيم الامتصاص عند الأطوال الموجية 750 نانومتر، 663 نانومتر، 645 نانومتر، و630 نانومتر، على التوالي. استخدم الأسيتون 90% كقياس امتصاص فارغ لتصحيح امتصاص العينة.